冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷凍到一定的硬度，然后進(jìn)行切片的一種方法。制作過(guò)程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便，因而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。

腦組織冰凍切片的制作步驟

1、固定。大鼠或小鼠灌注取腦，取腦后用多聚甲醛浸泡固定，即能達(dá)到?jīng)_洗的目的，又不損害組織。

2、脫水。先后用15%，20%，30%的PB蔗糖溶液 進(jìn)行腦組織梯度脫水，腦組織沉下去就是脫水好了。

3、冰凍切片，推薦瑞沃德冷凍切片機(jī)。取出腦組織，用OCT膠包埋，一層層的包埋，注意:不能有氣泡，否則營(yíng)銷切片；不能留有空隙否則會(huì)凍壞腦組織。冰凍切片的溫度是-18℃～-25℃之間都可以的，腦組織最好是-18℃。

冰凍切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟

1、組織用4%多聚甲醛固定6-8小時(shí)，轉(zhuǎn)至20%蔗糖溶液至組織沉底。

2、冰凍切片8-10μm，推薦瑞沃德冷凍切片機(jī)，溫度穩(wěn)定，切片質(zhì)量高。室溫放置30分鐘以上防脫片，-20℃保存。從冰箱拿出的冰凍切片在室溫放置30分鐘以上再進(jìn)行免疫熒光。

3、1xPBS洗3次，每次3-5分鐘。

4、用2%BSA室溫或37℃封閉1小時(shí)。

5、一抗4℃孵育過(guò)夜。1xPBS洗3次，每次3-5分鐘。

6、二抗室溫或37℃，避光孵育1小時(shí)。1xPBS洗3次，每次3-5分鐘。

7、DAPI染色。1xPBS洗3次，每次3-5分鐘。

8、滴加防淬滅劑，封片。

瑞沃德冷凍切片機(jī)最大的優(yōu)勢(shì)是智能恒溫，全開(kāi)窗切片超過(guò)3小時(shí)以上，箱體溫度波動(dòng)不超過(guò)2℃，使用者再也不需要半掩玻璃窗操作，即使樣本再多，也能一次性順暢的完成所有切片工作。此外，它獨(dú)特的功能還有：專利可視指針標(biāo)識(shí)，精準(zhǔn)快速定位樣本；智能廢液管理系統(tǒng)，防止廢液溢出污染地面；自動(dòng)休眠和喚醒，節(jié)能同時(shí)消除等待時(shí)間；樣品托標(biāo)簽設(shè)計(jì)，防止弄混。