單細(xì)胞樣本制備老失敗？

流式實(shí)驗(yàn)得到數(shù)據(jù)不可靠？

流式圖不知道怎么分析？

「全線賦能“沃”的實(shí)驗(yàn)」之實(shí)驗(yàn)方法實(shí)戰(zhàn)教程

直播第四期將帶來(lái)

《流式細(xì)胞術(shù)》

從單細(xì)胞制備到流式細(xì)胞術(shù)，理論+實(shí)例

帶你快速get到其中的難點(diǎn)要點(diǎn)

直播時(shí)間

5月31日（周二）19：00

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主題：?jiǎn)渭?xì)胞懸液樣本的分類及制備

① 單細(xì)胞懸液樣本類型

② 制備注意事項(xiàng)

③ 制備方法實(shí)例

講師：馮啟崢

瑞沃德高級(jí)產(chǎn)品方案經(jīng)理，專注動(dòng)物傳染病學(xué)和細(xì)胞與分子免疫學(xué)研究多年，在動(dòng)物疫苗研發(fā)、CRISPR的原核細(xì)胞應(yīng)用方面有著較為豐富的經(jīng)驗(yàn)，致力于為客戶提供專業(yè)的細(xì)胞與分子生物研究方案。

主題：流式細(xì)胞術(shù)的原理及應(yīng)用

① 儀器基本結(jié)構(gòu)解析

② 實(shí)驗(yàn)方法實(shí)操講解

③ 技術(shù)應(yīng)用介紹

講師：方晟

昆明理工大學(xué)碩士研究生，已發(fā)表SCI論文4篇，在載體構(gòu)建、藥物活性篩選、腫瘤模型構(gòu)建、單細(xì)胞數(shù)據(jù)分析等方面有著豐富的經(jīng)驗(yàn)，研究方向主要是抗腫瘤藥物的抗癌機(jī)理和單細(xì)胞測(cè)序分析。

上期直播間互動(dòng)問(wèn)題

這次我們?nèi)繛樾』锇榻獯?/strong>

1、做外周神經(jīng)損傷的小鼠能活多久？如何飼養(yǎng)？

外周神經(jīng)損傷一般不會(huì)造成動(dòng)物的死亡，但一些特殊情況會(huì)影響動(dòng)物的存活率，比如為了避免在手術(shù)部位引起不良組織炎癥，我們應(yīng)該盡量縮短手術(shù)時(shí)間，如果手術(shù)部位意外出血，要用棉簽適當(dāng)按壓。如果出血沒(méi)有停止，就不要對(duì)這只動(dòng)物進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。術(shù)后動(dòng)物應(yīng)該放進(jìn)干凈的鼠籠并分籠飼養(yǎng)，注意保溫。

2、脊髓損傷造模后，動(dòng)物出現(xiàn)功能障礙不能自主排尿該如何護(hù)理？

每日按壓排尿3次，以防泌尿系統(tǒng)感染；連續(xù)3天，每天兩次向腹腔注射相同劑量青霉素預(yù)防感染。

3、使用纖維蛋白膠修復(fù)的是外周神經(jīng)損傷的哪個(gè)類型或者說(shuō)等級(jí)呢?

纖維蛋白膠可以應(yīng)用于橫斷的神經(jīng)，幫助受傷神經(jīng)的近端和遠(yuǎn)端殘端緊密對(duì)齊，是神經(jīng)縫合技術(shù)的一種替代方式。

4、坐骨神經(jīng)擠壓的結(jié)扎力度如何把控？

有一些文獻(xiàn)上會(huì)使用帶有力值的工具進(jìn)行擠壓神經(jīng)，如果我們沒(méi)有這類的工具，可以使用血管夾對(duì)神經(jīng)進(jìn)行夾持，保證力度的一致性。

5、有專門(mén)評(píng)估大小鼠前肢抓取能力的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)嗎?

針對(duì)于前肢的抓取能力，爪抓力測(cè)試儀可以測(cè)動(dòng)物前肢，后肢的抓力，另外如果是判斷動(dòng)物前肢抓取食物的精細(xì)運(yùn)動(dòng)，可以用樓梯式抓取測(cè)試儀來(lái)進(jìn)行。

6、目前好像2D步態(tài)分析居多，慢慢也看到了3D步態(tài)分析，兩者相比各自有什么優(yōu)缺點(diǎn)呢?

步態(tài)沒(méi)有2D、3D的區(qū)別，國(guó)內(nèi)使用較多的步態(tài)有2種：第一種是依靠壓力感應(yīng)可以生成動(dòng)物腳掌受力的情況，判斷動(dòng)物的損傷情況；第二種是通過(guò)視頻記錄動(dòng)物足部在運(yùn)動(dòng)時(shí)的軌跡，通過(guò)足部的運(yùn)動(dòng)過(guò)程計(jì)算生成動(dòng)物活動(dòng)過(guò)程中四肢運(yùn)動(dòng)的各項(xiàng)指標(biāo)來(lái)判斷動(dòng)物的損傷情況。這兩種方法從2個(gè)不同的方面完善了步態(tài)的分析數(shù)據(jù)，但實(shí)際上無(wú)法互相替代。一般來(lái)說(shuō)大鼠步態(tài)用第一種壓力感應(yīng)測(cè)試的會(huì)多一些，小鼠步態(tài)則用視頻記錄的多一些。所謂的3D步態(tài)是通過(guò)從側(cè)面拍攝動(dòng)物運(yùn)動(dòng)時(shí)的腿部活動(dòng)，對(duì)動(dòng)物的步態(tài)運(yùn)動(dòng)進(jìn)行更為細(xì)致的評(píng)估，與傳統(tǒng)步態(tài)記錄的是2個(gè)維度的信息，無(wú)法進(jìn)行替代。由于需要識(shí)別動(dòng)物腿部的關(guān)節(jié)，目前無(wú)法與足底步態(tài)很好的融合結(jié)果。

7、這種轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)是可以大小鼠通用的嗎？如何檢測(cè)到掉落？

轉(zhuǎn)棒大小鼠主機(jī)通用，但是跑道是需要替換的。設(shè)備通過(guò)紅外感應(yīng)，電子感應(yīng)等自動(dòng)檢測(cè)動(dòng)物掉落情況，停止計(jì)時(shí)。

8、外周神經(jīng)損傷會(huì)導(dǎo)致疼痛致敏，在模型檢測(cè)中可以用什么疼痛檢測(cè)方法呢？

主要看測(cè)痛的部位，機(jī)械痛一般可以用vonfery針或電子測(cè)痛儀來(lái)進(jìn)行測(cè)試，針對(duì)不同部位也有面部疼痛測(cè)試儀（三叉神經(jīng)），壓感測(cè)痛儀（背部，較大的關(guān)節(jié)），鉗式測(cè)痛儀（整個(gè)腳，細(xì)小的關(guān)節(jié)），熱痛一般測(cè)試動(dòng)物足底或尾部，使用紅外測(cè)痛儀或者甩尾測(cè)痛儀。

9、怎么手動(dòng)排尿？

按摩膀胱。

10、每天需要按摩多久？

術(shù)后需輕輕按摩擠壓膀胱進(jìn)行排尿，每次按摩到排空，每天至少三次。

11、不規(guī)則梯和錯(cuò)步分析儀是不是指一個(gè)東西啊？

是一種類型的儀器，不同廠家的名稱，測(cè)試方法，輸出的指標(biāo)會(huì)略有不同。

12、轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)一直做不出差異怎么辦？

可能有2種原因：

①測(cè)試時(shí)動(dòng)物已經(jīng)恢復(fù)到與正常鼠一致的水平，所以做不出差異。 

解決方法：將轉(zhuǎn)棒測(cè)試時(shí)間提前。

②測(cè)試難度過(guò)于簡(jiǎn)單或者過(guò)于困難，導(dǎo)致差異很小，從而統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果無(wú)差異。

解決方法：調(diào)整實(shí)驗(yàn)難度，直到可以做出差異的結(jié)果。新型轉(zhuǎn)棒儀除了原先的勻速和勻加速以外還增加了階段加速等測(cè)試方法，實(shí)驗(yàn)難度有了更大的調(diào)整空間。

13、兩爪及四爪攀爬實(shí)驗(yàn)有合適的實(shí)驗(yàn)設(shè)備嗎？

不規(guī)則梯結(jié)合自制實(shí)驗(yàn)設(shè)備。

14、脊髓損傷后有哪些評(píng)估手段？

脊髓損傷后可通過(guò)行為學(xué)對(duì)運(yùn)動(dòng)及感覺(jué)進(jìn)行評(píng)估。BBB法：一般用于觀察大鼠后肢行走及肢體活動(dòng)，評(píng)分分為三個(gè)部分，0-7分評(píng)判動(dòng)物后肢關(guān)節(jié)活動(dòng)情況，8-13分評(píng)判后肢步態(tài)及協(xié)調(diào)功能，14-21分評(píng)判運(yùn)動(dòng)中爪的精細(xì)活動(dòng)；BMS評(píng)分是在BBB評(píng)分基礎(chǔ)上針對(duì)小鼠的運(yùn)動(dòng)特點(diǎn)做出了完善和修改，是專門(mén)用于小鼠后肢功能的評(píng)分方法。其他運(yùn)動(dòng)相關(guān)行為學(xué)：步態(tài)分析系統(tǒng)用于評(píng)估步態(tài)動(dòng)力學(xué)、協(xié)調(diào)性分析、平衡性分析等；轉(zhuǎn)棒儀可評(píng)估動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性；行走障礙分析儀可分析簡(jiǎn)單步態(tài)及運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性等。感覺(jué)功能相關(guān)行為學(xué)：Vonfrey測(cè)痛針用于評(píng)估對(duì)觸碰的敏感性；冷熱盤(pán)用來(lái)測(cè)試動(dòng)物對(duì)冷熱刺激的敏感度。

15、平衡木也可以做小鼠嗎 ？

有小鼠平衡木可以進(jìn)行小鼠實(shí)驗(yàn)。

16、請(qǐng)問(wèn)外周神經(jīng)損傷后有哪些手段可以評(píng)價(jià)感覺(jué)功能的損失？

感覺(jué)功能相關(guān)行為學(xué)：機(jī)械痛一般可以用vonfery針或電子測(cè)痛儀來(lái)進(jìn)行測(cè)試，評(píng)估對(duì)觸碰的敏感性，針對(duì)不同部位也有面部疼痛測(cè)試儀（三叉神經(jīng)），壓感測(cè)痛儀（背部，較大的關(guān)節(jié)），鉗式測(cè)痛儀（整個(gè)腳，細(xì)小的關(guān)節(jié)），熱痛一般測(cè)試動(dòng)物足底或尾部，使用紅外測(cè)痛儀（用于量化對(duì)小鼠和大鼠后爪輻射或紅外熱刺激的熱閾值的方法）或者甩尾測(cè)痛儀（一種基于對(duì)嚙齒動(dòng)物中熱刺激回避反應(yīng)的潛伏期測(cè)量的疼痛實(shí)驗(yàn)）。

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