你在做光纖記錄實(shí)驗(yàn)陶瓷插針埋植手術(shù)，你是不是也遇到過：

埋植光纖的手術(shù)操作難度較大，一不小心又得重做；

無法找到最佳的光纖位點(diǎn)；

操作不當(dāng)很容易損害周邊血管、神經(jīng)、脂肪組織；

埋植位置不精準(zhǔn)。

本文從材料和試劑、設(shè)備和實(shí)驗(yàn)過程三個(gè)方面，為大家梳理光纖記錄實(shí)驗(yàn)光纖埋植手術(shù)操作，助力各位實(shí)驗(yàn)技能的提升！

一、材料和試劑

濾紙、多模光纖、陶瓷插芯、注射套管、1ml 注射器、鋁箔、陶瓷套管、套管防塵帽、封口膜、棉簽、C57BL / 6 小鼠、AVV 病毒（儲(chǔ)存在-80°C直至使用滴度為 1011至 1013pfu/ml）、牙科水泥、環(huán)氧樹脂、縫合套件、淚凝膠、碘伏、鹽水、70％乙醇、過氧化氫、冰、鎮(zhèn)痛藥

二、設(shè)備

切割器、光纖剝離工具、10μL 移液器、數(shù)字卡尺、腦立體定位儀、異氟烷麻醉系統(tǒng)、體溫維持儀、加熱墊、手術(shù)工具（包括剪刀，鑷子，手術(shù)刀）、顱鉆、鉆頭、注射泵、微量注射器、光纖、高壓滅菌器

三、實(shí)驗(yàn)過程

1. 光纖插芯制作

1) 使用光纖剝離工具剝離多模光纖。

2)使用切割器對(duì)剝離的多模光纖片段進(jìn)行切割。

3) 將光纖插入陶瓷插芯。

4)使用環(huán)氧樹脂將光纖固定到陶瓷插芯上，磨平凸起的插芯末端。

5)切割另一端至合適的長(zhǎng)度，該長(zhǎng)度使用數(shù)字卡鉗測(cè)量的適當(dāng)目標(biāo)長(zhǎng)度，例如， 長(zhǎng)度= 6.4 mm（陶瓷插芯）+ 0.5 mm（插芯和顱骨之間的間隙）+參考腦圖確 定所需的目標(biāo)深度。

6)檢測(cè)打磨后的光纖：首先把光纖插芯插入套管，不合格的插芯在末端的光斑。

7)比較小（沒磨平，接觸不良，耗散大），合格的插芯會(huì)有一個(gè)圓形集中的光 斑。

8) 光纖干燥過夜。

9) 植入前對(duì)光纖高壓滅菌。

10)確認(rèn)每個(gè)光纖的透射率，每個(gè)光纖的激光透射率必須> 75％。

2. 動(dòng)物準(zhǔn)備

1) 小鼠稱重。

2) 在異氟烷誘導(dǎo)盒中麻醉小鼠（4％，1 L / min）。

3) 將小鼠嘴部放在麻醉面罩中。

4) 給予止痛藥（例如Dolorex 10 mg / ml，在鹽水中按1:20 稀釋，每25g 動(dòng)物 使用0.1ml）麻醉后皮下注射。

5) 剃掉從眼睛到耳朵后面的毛發(fā)。

6)將小鼠放在加熱墊上，并用適配器固定在腦立體定位儀上，并將異氟烷調(diào)整為0.5-1％。

7)麻醉可通過對(duì)腳趾捏合無反應(yīng)（監(jiān)測(cè)腳趾捏合反應(yīng)）來確認(rèn)，手術(shù)期間每20分鐘一次。

8)用棉簽蘸少量碘伏清潔頭部。

9) 在頭皮表面下注入0.1 ml 利多卡因，以提供局部鎮(zhèn)痛作用。

10)保護(hù)眼睛避光：涂上眼藥膏并蓋好。

3. 切口和開顱手術(shù)

1) 從前到后（眼睛之間到顱骨后部）做切口。

2) 用蘸有鹽水的棉簽擦拭切口。

3) 將小鼠門齒扣在適配器的齒棒上，套好 麻醉面罩，耳桿插入小鼠耳蝸（保證兩 側(cè)耳桿刻度一致）。

4) 找到并標(biāo)記Bregma（前囟點(diǎn)）位置。

5）確保頭骨干凈（沒有血液，毛皮或組 織）并且干燥（使用干燥的棉簽吸收蒸 餾水或血液）。

6）將注射泵夾持到定位儀上，用熱熔膠將 玻璃電極焊接到微量注射器上并安裝到微量注射泵上。

7）將該點(diǎn)設(shè)定為原點(diǎn)，而后測(cè)量Bregma 點(diǎn)左右兩側(cè)旁開2.3mm 處顱骨的高度 差，小于 0.03mm 則認(rèn)為左右顱骨水平，大于0.03mm 則需要調(diào)節(jié)耳桿的高度來 調(diào)整水平，前后方向測(cè)量 Bregma 點(diǎn)和Lambda 點(diǎn)的高度差， 也需小 0.03mm， 若大于 0.03mm 則上下調(diào)整鼻夾的高度（注意：移動(dòng)顱骨后需要重新定Bregma 點(diǎn)）。

8）腦圖譜中查詢目標(biāo)腦區(qū)的坐標(biāo)。

9）標(biāo)記目標(biāo)位置。

10）在目標(biāo)標(biāo)記點(diǎn)處用顱鉆進(jìn)行開顱。如果發(fā)生出血，請(qǐng)使用棉簽清潔血液，然 后使用一塊可吸收的海綿來止血。

11）用鹽水浸濕的海綿覆蓋開顱部位。

4.病毒注射

1) 從冰箱中取出病毒。

2) 設(shè)置注射泵參數(shù)（例如吸取體積300nL，速度為800nL/min，模式調(diào)為吸入Withdraw）吸取病毒，使其尖端接觸Bregma 點(diǎn)并設(shè)定原點(diǎn)。

3) 取走開顱部位濕海綿。

4)將微量注射針移動(dòng)至目標(biāo)位點(diǎn)上方，然后下針至目標(biāo)位點(diǎn)（下針過程保持勻速 緩慢），設(shè)置注射泵參數(shù)（體積 300nL，速度30nL/min，模式調(diào)為泵出Infuse）,開始注射病毒。

5) 注射完成后靜置10min，10min后將微量注射器抬起。

6) 用鹽水浸濕的海綿覆蓋開顱手術(shù)部位。

5、光纖埋置

1)在病毒注射后，從腦立體定位儀上取下注射泵。

2) 根據(jù)目標(biāo)位點(diǎn)坐標(biāo)的AP/ML，用顱鉆在顱骨上打孔。

3)將光纖插針用夾持器固定到腦立體定位儀上。

4) 固定光纖之后需要用光纖尖部接觸Bregma 點(diǎn)，重新移動(dòng)至目標(biāo)位點(diǎn)上方（光 纖應(yīng)位于鉆頭產(chǎn)生的窗口上方）。

5) 將光纖下降到適當(dāng)?shù)腄V 坐標(biāo)。

6)用牙科水泥固定光纖（注意：牙科水泥輕輕涂抹在光纖纖維的底部周圍）。

7) 縫合皮膚和清潔手術(shù)部位。注入適當(dāng)?shù)逆?zhèn)痛藥并將小鼠放在單獨(dú)的加熱墊上 1小時(shí)。在將其放到新籠子之前，確保小鼠完全蘇醒，小鼠在手術(shù)后單獨(dú)飼養(yǎng)，術(shù)后監(jiān)測(cè)健康情況。

成功埋植后，還需進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)

高敏感的信號(hào)檢測(cè)技術(shù)手段

有助于獲取高質(zhì)量的熒光數(shù)據(jù)

助力實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的提升

兩種技術(shù)聯(lián)用

兼容光遺傳功能的光纖記錄系統(tǒng)

瑞沃德R821三色多通道光纖記錄系統(tǒng)（可兼容光遺傳），通過一根光纖即可實(shí)現(xiàn)同一位點(diǎn)記錄和刺激。無需復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)操作，只需植入一根陶瓷插針即可完成兩種技術(shù)的聯(lián)用。

優(yōu)點(diǎn)：

避免多根插針植入導(dǎo)致坐標(biāo)誤差，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為精準(zhǔn)；

光路統(tǒng)一，避免信號(hào)串?dāng)_；

減少線路連接，輕松提高實(shí)驗(yàn)效率。